Анализ на сальмонеллез: методы и лабораторная диагностика

Анализ на сальмонеллез. Сальмонеллез — это опасная пищевая инфекция, которой можно заразиться при попадании в организм патогенной бактерии — сальмонеллы.

Возбудителем заболевания является бактерия в виде палочки с загнутым концом — сальмонелла. Проявление заболевания предполагает скорый инкубационный период — от нескольких часов до 5 суток, после чего болезнь можно заподозрить по характерным симптомам. Легкость в опознании состоит также в том, что эти симптомы не являются типичными для других кишечных инфекционных заболеваний ребенка.

Заражение, как правило, происходит при употреблении в пищу продуктов животного происхождения: мяса, яиц, молока, а также при контакте с инфицированными людьми. Вспышки сальмонеллеза чаще всего носят массовый характер, пик заболеваемости приходится на летний период.

Что известно о возбудителях сальмонеллеза?

В 1880 году впервые выделена сальмонелла у больного брюшным тифом. Дальнейшее изучение позволило обнаружить почти аналогичные бактерии у свиней, кур, других животных. Оказалось, что возбудители сальмонеллеза чаще всего находят у пациентов с клинической картиной острого отравления или гастроэнтерита.

Данные современных микробиологических исследований позволяют разделить класс сальмонелл на два вида и выделить 7 подтипов. Раньше считалось, что их значительно больше, но иммунологическим изучением возбудителей доказана многочисленная разновидность, связанная с антигенным составом (до 2500).

Диагноз сальмонеллеза ставится после выявления конкретной причины у больного. Для человека основным поражающим видом является подвид Еnterica. Он выявлен у 99% заболевших. Подтип сальмонеллы Typhimurium — способен вызвать тяжелое распространенное (генерализованное) поражение с наличием возбудителя в крови.

Редко обнаруживаются такие варианты, как:

• Choleraesuis,
• Heidelberg,
• Derby,
• Anatum.

Копрологическое исследование изменение структуры кала

При сальмонеллезе присутствуют определенные изменения кала. Это свидетельствует о том, что бактерии начали влиять на функции и состояние кишечника, а именно:

• выделение с калом крови, лейкоцитов, эритроцитов,
• объем крахмала в организме увеличивается,
• увеличивается количество мышечных волокон, не переваренных в зараженном сальмонеллами желудочно-кишечном тракте.

Серологическое исследование делается на протяжении 5-7 дней, а диагностика методом ПЦР займет сутки. Сколько понадобится времени, прежде чем придет ответ зависит только от того, какой анализ был назначен. Лишь доктор поставит правильный диагноз и назначит необходимое лечение на основе жалоб, осмотра и результатов диагностики.

Характеристика возбудителя

Сальмонеллы имеют вид палочек, по отношению к окраске Грамм-отрицательны. Хорошо двигаются. Способны образовать защитную капсулу из полисахаридов. Относятся к факультативным (условным) анаэробам, то есть способны жить как в кислородной среде, так и без него. Энергию получают в результате окислительно-восстановительных реакций соединений, добытых из организма носителя.

Сальмонеллы снабжены множеством пилей (ворсинки на поверхности) и жгутиками

Биохимические свойства положены в основу создания питательных сред. Сальмонеллы способны расщеплять многие углеводы (кроме лактозы, сахарозы), включая глюкозу, мальтозу, арабинозу, и образовывать при этом кислоту и газ.

Отдельные типы имеют отличительные свойства, что также используется в микробиологической диагностике. Например, Тyphi не образует газ, а Paratyphi A не выделяет индол. Все сальмонеллы расщепляют белок до сероводорода. Не имеют фермента оксидазы, содержат каталазу.

Сальмонеллы отличаются живучестью и сохранением заразности :

• в реках и открытых водоемах — 120 суток;
• соленой морской воде — месяц;
• земле до 9 месяцев;
• пыли домашнего происхождения — до 1,5 лет;
• колбасе и мясных изделиях — от 2 до 4 месяцев;
• при заморозке мяса — 12 месяцев;
• яйцах — 1 год;
• в скорлупе — почти месяц.

Сальмонеллы используют такие продукты, как молоко, творог, сметану, фарш в качестве питательной среды, где активно размножаются.

Бактерии особо чувствительны к нагреванию, кипячению, действию хлоросодержащих дезинфицирующих средств.

Методика проведения экспертизы

Сколько делается анализ, зависит от степени загруженности лаборатории. Максимальный срок исполнения составляет две недели. Длительность исследования обусловлена сложным механизмом проведения посева каловых масс.

Оценка состояния микрофлоры кишечника включает:

• Бактериоскопия кала (изучение с помощью микроскопа) на наличие патогенных микроорганизмов.
• Бактериологический посев. Образцы экскрементов распределяются по нескольким лабораторным емкостям, предварительно наполненным питательными средами для роста бактерий. Если патогены присутствует в каловых массах, в благоприятной среде они начинают активно размножаться, образуя колонии. Количество КОЕ определяет тяжесть инфекции.
• Определение резистентности (устойчивости) выявленных бактерий к разного вида антибиотикам.

Последний пункт исследования позволяет врачу подобрать максимально эффективный лекарственный препарат и назначить правильную схему терапии.

Какие свойства определяют способность сальмонелл заражать человека?

Степень заразности определяется факторами вирулентности сальмонелл. К ним относятся:

• синтез особых белков, способствующих проникновению возбудителя вовнутрь эпителиальных клеток кишечника и обеспечивающих выживаемость;
• стимуляция сальмонеллами цитокинов и хемокинов к воспалительной реакции;
• разрушение макрофагов крови человека;
• размножение внутри макрофагов с выделением эндотоксинов;
• действие эндотоксинов способствует поражению сосудов и нервных окончаний кишечника, повышает проницаемость клеток;
• стимуляция выделения хлоридов и выраженной диареи.

Какие антигенные свойства сальмонелл используются в диагностических целях?

Иммунная диагностика сальмонеллеза имеет богатые возможности благодаря наличию у возбудителя выраженных антигенных свойств. По ним можно типировать вид сальмонеллы. Различают 3 основных антигена:

• О-антиген — выдерживает длительное кипячение (2,5 часа), имеет свойства эндотоксина;
• Н-антиген — находится в жгутиках, разрушается при нагревании выше 75 градусов, состоит из белка флагеллина. Существенным отличительным признаком от других энтеробактерий является способность выделять по фазам оба антигена.
• К-антиген — содержится в капсуле.

Vi-антиген характерен только для возбудителей тифа и паратифа. По антигенной преобладающей структуре Ф. Кауфман и П. Уайт в 2001 году предложили классификацию сальмонелл, которая используется и поныне.

Для проведения иммунных тестов сальмонеллеза у пациента, контактного человека берут анализ крови или мочи

Серологическое исследование считается довольно трудоемким, поэтому используется редко в виде реакции гемагглютинации, при помощи эритроцитарных диагностикумов. Определяется не только наличие антител, но и их титр. Для анализа достаточно 1–2 мл крови. Ее разводят изотоническим раствором и добавляют диагностикум с О-антигеном.

Имеет значение результат при определении антител в разведении 1/100 и росте титра в динамических исследованиях почти в 4 раза.Более чувствительной считается реакция непрямой гемагглютинации.

Возможны отрицательные результаты:

• в случаях легких форм болезни;
• наоборот, при тяжелом течении сальмонеллеза, у новорожденных и грудничков.

Если берут анализ на сальмонеллез из кала или мочи, то используются реакции коагглютинации и иммуноферментный метод.

Лечение

Для лечения заболевания госпитализация производится только при тяжелом течении заболевания или при течении осложненном. Помимо этого в качестве причины для госпитализации могут выступать эпидемиологические показания. При выраженной интоксикации и обезвоживании показан постельный режим.

В том случае если состояние больного в соответствии с клиническими его особенностями позволяет проводить лечение с применением тактики промывания желудка, использованием сифонных клизм и различных энтеросорбентов, они, соответственно, и применяются.

Также лечение ориентировано на устранение состояния, сопутствующего дегидратации (обезвоживанию), что, прежде всего, требует внутреннего применения растворов глюкозо-солевого состава (Регидрон, Цитроглюкосолан, Оралит и пр.), что требует предварительного учета солевого и водного дефицита до того как была начата терапия, восполнение производится частым и дробным питьем (до 1,5л/ч.) на протяжении двух-трех часов. Учитывается также и последующая потеря жидкости (уже после реализации данных мер терапии). Указанные растворы целесообразно применять при I-II степенях обезвоживания, если же речь идет о III и IV степени, то здесь уже применяются полиионные изотонические кристаллоидные растворы, введение их осуществляется внутривенным образом, струйно, до наступления состояния, при котором исчезают признаки, указывающие на дегидратационный шок, после чего введение растворов происходит капельным методом.

Интоксикация с сопутствующими ей признаками устраняется, в случае рассмотрения гастроинтестинальной формы заболевания, использованием, например, индометацина. Актуальность его применения определяется ранними сроками течения заболевания, прием заключается в трехкратной дозировке в течение 12 часов 50 мг. Антибиотики, как и иные виды этиотропных препаратов, в случае гастроинтестинальной формы не назначаются. Необходимость их использования диктуется исключительно генерализованной формой течения заболевания в форме и виде, определяемыми в индивидуальном порядке. Также в этом случае целесообразным вариантом является назначение ферментных препаратов комплексного типа. Дополнительно назначается диета №4 при диарее, после исчезновения диареи – диета №13.

Для диагностирования заболевания при наличии актуальной для него симптоматики необходима консультация инфекциониста.

https://youtube.com/watch?v=8qyQrGcOZqc

Культуральные свойства сальмонелл и их значение в бак. диагностике

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основывается на бактериологическом способе исследования кала. Он гораздо доступнее и достаточно информативен. Проводится в эпидемиологических лабораториях по направлению врача.

Учитываются способности возбудителя:

• расти на самых простых питательных средах при температуре 8–45 градусов;
• образовывать равномерное помутнение в жидкой среде;
• давать полупрозрачные бесцветные колонии на мясопептонном агаре.

Существуют селективные среды. Так называют добавление специфических веществ, при которых выживают только колонии сальмонелл. К ним относятся любые среды с желчью, селенитовый бульон, висмут-сульфит-агар. Дифференциально-диагностическими средами считаются лактозосодержащие варианты: Эндо, Левина, МакКонки. Колонии вырастают бесцветными, поскольку сальмонеллы неспособны раcщеплять лактозу.

Для посева петлей берется образец материала и размазывается на чашке Петри, содержащей питательную среду

Сальмонеллы можно выявить в фекалиях, рвотных массах, моче, промывных водах из желудка, в крови и спинномозговой жидкости. Оптимальным считается посев крови в течении периода повышения температуры. Из локтевой вены достаточно взять около 7 мл крови, провести засев в желчный бульон или на среду Рапопорта.

Бак анализ включает обязательное исследование биохимических свойств возбудителя, изучение строения под микроскопом. При определении длительности исследования приходится учитывать не только работу лаборантов, но и сколько времени занимает рост колоний.

Обычно результат выдается спустя неделю. Положительные данные получают при бак исследовании у 40–80% пациентов с симптомами сальмонеллеза. Максимальная высеваемость приходится на первые 7 дней заболевания.

При эпидемиологическом расследовании вспышки сальмонеллеза по указанию врача для анализа берутся:

• остатки приготовленных блюд;
• продукты, использованные в кулинарной обработке;
• смывы с кухонного оборудования, тарелок;
• при выявлении заражения в медицинском учреждении — смывы с рук персонала, оборудования.

Каждый случай учитывает соблюдение технологии приготовления пищи, санитарную обработку и состояние объекта.

На висмут-сульфит-агаре образуются характерные черные блестящие колонии

Подготовка и сбор биоматериала

Для получения достоверных результатов пациенту следует придерживаться условий предварительной подготовки и правил сбора экскрементов для экспертизы. Одним из важнейших условий подготовительного этапа является запрет на самостоятельное (без врачебных рекомендаций) применение:

• препаратов антибактериальной терапии;
• слабительных и закрепляющих средств;
• таблеток, усиливающих перистальтику;
• сорбентов (Полисорб, Активированный угль, Энтеросгель и т.п.).

Перечисленные медикаменты способны уничтожить часть кишечной микробиоты. Это негативно отразиться на точности результатов анализа.

Обязанности пациента в подготовительный период включаю следующее. За 2-3 суток до сдачи биоматериала ликвидировать из рациона тяжелую жирную пищу (мясо, грибы, жирные соусы), продукты, провоцирующие метеоризм (капусту, молоко, черный хлеб, блюда из бобовых культур), газированные напитки, сладкую сдобную выпечку.

За три дня исключить употребление алкоголя, отказаться от применения ректальных свечей, использования микроклизм, приобрести в аптеке стерильный герметичный контейнер с ложечкой для сдачи экскрементов на анализ (для жидкого стула нужно купить пипетку). Если пациенту назначено рентгенография органов пищеварения с контрастом, диагностику следует пройти после сдачи экскрементов на анализ.

Лучевая нагрузка и контрастное вещество, вводимое в организм, повлияют на микросреду кишечника, что может исказить итоговые данные. Грудным детям нельзя вводить в меню новые продукты (прикорм). Это может вызвать аллергию или диспепсический синдром (нарушение пищеварения).

Исследование каловых масс на дизгруппу предполагает два варианта сбора материала: самостоятельно в домашних условиях в аптечный контейнер, взятие ректального мазка (либо жидкой субстанции) в медицинском учреждении. Условия подготовки организма идентичные в обоих случаях.

Пригодными для микробиологического исследования являются образцы утреннего стула. Перед сбором биоматериала следует произвести гигиену аноректальной области (без парфюмированных очищающих средств) и опорожнить мочевой пузырь. Женщинам не рекомендуется собирать кал в первые семь дней фолликулярной фазы менструального цикла. При необходимости проведения срочной экспертизы нужно следить, чтобы менструальные выделения не попали в исследуемый материал.

Неправильным будет собирать кал непосредственно из унитаза. Необходимо воспользоваться судном либо обеспечить стерильность экскрементов при помощи полиэтиленовой пленки или канцелярской бумаги. У грудных детей допускается забор свежих каловых масс из подгузника. При этом следует обратить внимание, чтобы в контейнер не попали волокна гигиенического материала.

Пластиковой ложечкой, которой снабжен контейнер, необходимо переместить фрагменты фекалий в емкость. Если в экскрементах присутствуют патологические гнойные, хлопьевидные или слизистые примеси, их частички необходимо отправить на анализ. Заполнить третью часть контейнера и герметично закрыть крышку.

Наибольшую информативность данных обеспечивает незамедлительная доставка экскрементов к месту исследования (в лабораторию). Замораживать или оставлять при комнатной температуре образцы нельзя. Факультативные анаэробы плохо переносят изменение температурного режима и могут погибнуть. В таком случае исследование потеряет смысл.

Взятие мазка в медицинском учреждении производится при помощи тампона. В прямую кишку вводится стерильный ватный тампон, несколько раз прокручивается и извлекается. После этого образец помещается в лабораторную емкость с жидким питательным содержимым.

Образец жидкого стула берут посредством катетера. Данный способ предназначен для забора жидких каловых масс. Один конец медицинского инструментария вводится ректально пациенту, другой помещается в лабораторную посуду. Процедура забора ректального мазка может доставить незначительный временный дискомфорт в аноректальной области.

Как лабораторным способом выявляют пути заражения?

Для определения кому и как сдавать анализ на сальмонеллез учитываются возможные источники возбудителя. Больной человек с легкой формой или носитель — выявляется при обследовании всего персонала, круга контактных лиц взятием мазка кала на дизгруппу.

В исследование включены наиболее распространенные инфекционные заболевания, проявляющиеся одинаковой клинической картиной (понос, температура, боли в животе, рвота):

• дизентерия,
• сальмонеллез,
• амебиаз,
• ротавирусная инфекция.

Забор материала проводится из анального отверстия только под контролем медицинского работника в инфекционном кабинете стерильной тонкой ватной палочкой. В случае выявления сальмонелл или других инфекционных агентов сотрудника отстраняют от работы на срок лечения и получения контрольных отрицательных результатов.

Домашние птицы (куры, утки, индюки) — являются источником заражения человека в половине случаев. Сальмонеллы находятся внутри кишечника или в крови птицы, проникают сквозь скорлупу яиц несущихся особей. Заражение происходит при употреблении невареных яиц. Недостаточной температуре кулинарной обработки.

Некоторые мамы практикуют приготовление для детей напитка из взбитых сырых яиц с сахаром и молоком, забывая про сальмонеллез

Домашние животные (кошки, собаки, хомячки, мыши), а также скот (свиньи, коровы) могут быть носителями инфекции. Они передают сальмонелл через загрязненную калом, слюной, мочой внешнюю среду. Детям достается возбудитель с грязными руками. До 20% случаев заражения зависят от употребления свинины, говядины.

Очень редким источником считается рыба, моллюски, раки, крабы.

Мясо может заразить больной человек в процессе транспортировки, хранения, переработки.

Показатели результатов

При формировании сальмонеллеза и проведении определенной диагностики врачи расшифровывают полученные данные и делают выводы о состоянии здоровья пациента, течении болезни. Ниже приведены признаки патологии, выявляемые с помощью изучения биологического материала.

Расшифровкой результатов должен заниматься доктор, так как только он может сопоставить клиническую картину с заключениями обследования.

Эпидемиологическая диагностика

Диагностика сальмонеллеза учитывает:

• клиническое течение и особенности симптоматики;
• уточнение очага распространенности;
• обследование контактных лиц;
• выявление нарушения санитарных норм;
• исследование продуктов питания.

Особую опасность представляют групповые случаи заболевания в род. домах, психиатрических стационарах, домах престарелых и инвалидов. Сальмонеллез может привести к прерыванию беременности у будущей матери, смертельному исходу младенцев.

Санитарной службе предоставлены широкие права по проведению расследования для выявления источников инфекции и быстрейшей локализации распространения

Принимаются решения о временном закрытии торговых точек, стационаров или перепрофилизации в инфекционное отделение, обработке помещений дезинфицирующими жидкостями. Виновников наказывают административными мерами, штрафами. От того насколько быстро сделают свою работу эпидемиологи зависит недопущение распространения инфекции на территории.

Анализ на сальмонеллёз

В рейтинговой схеме рекомендаций о принятии диагноза анализ на сальмонеллёз стоит на первом месте. Для справки: мнение экспертов стоит на последнем – четвёртом. В ходу бактериологический анализ (кала, крови). Это выращивает культуру, оценивает её стойкость к антибиотикам. Пищевое отравление сальмонеллой не считается опасным. Лекарства подобного рода применяют при генерализованной форме — при опасности осложнений.

О сдаче расскажет врач — в лабораториях подчёркиваются нюансы. Одни берут анализ кала на сальмонеллёз, другие — анализ крови. Фиксируется зависимость от стадии заболевания. Сначала выявляется гемокультура, затем появляются антитела. По изменению титра в двух пробах медики ставят диагноз. Бак. посев на сальмонеллёз – не единственная схема. Используются молекулярно-генетические методы (исследование ДНК).

Клиническая диагностика сальмонеллеза

Клиническая диагностика сальмонеллеза основана на учете специфических симптомов и отличительных признаков с другими похожими заболеваниями.

К типичным признакам сальмонеллеза относятся проявления острого поражения желудка и кишечника:

• начало внезапное, тяжесть быстро нарастает;
• повышение температуры, озноб;
• рвота съеденной пищей и желчью в первые часы заболевания;
• головная боль;
• максимальная болезненность в эпигастрии при гастритической форме, по ходу кишечника при гастроэнтеритическом течении, в правой подвздошной области в случае гастроэнтероколита;
• язык сухой, обложен густым налетом;
• скопление газа и урчание в кишечнике;
• понос с зеленоватыми фекалиями и зловонным запахом, примесью слизи и крови.

Для детей до года характерны обезвоженность организма, увеличение печени и селезенки, сонливость, вялость из-за токсического воздействия на мозг, возможны судороги.

Яркая клиническая картинка начинается с обычного ощущения слабости

В анализе крови наблюдается значительный лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, рост СОЭ. В большинстве случаев на этой стадии инфекционный процесс может завершиться.

Тяжелое течение (тифоподобное) наблюдается при попадании возбудителя сальмонеллеза в кровяное русло, сопровождается септическим состоянием, выраженной интоксикацией, розеолезной сыпью. Сальмонеллы при этом способны вызывать дистрофию в селезенке и печени, сформировать очаги вторичного гнойного воспаления по всему телу.

Особенности течения заболевания

После преодоления сальмонеллами факторов, относимых к неспецифической защите в среде ротовой полости, а также в среде желудка, они оказываются в среде просвета тонкой кишки – здесь происходит их прикрепление к энтероцитам при последующем выделении термостабильных или/и к термолабильных экзотоксинов. В процессе взаимодействия бактерий и эпителиальных клеток начинают происходить дегенеративные изменения со стороны микроворсинок. Процессу интервенции возбудителя сальмонеллеза к подслизистому слою в кишечной стенке начинают препятствовать фагоциты, а это, в свою очередь, приводит к развитию активной воспалительной реакции.

Разрушение бактерий сопровождается высвобождением эндотоксина, который, в свою очередь, играет главную роль в развитии интоксикационного синдрома. В дальнейшем, на фоне специфического воздействия инфекции и процессов, актуальных для этого, развивается диарея и обезвоживание организма, причем обезвоживанию в особенности способствует оказываемое бактериальными энтеротоксинами действие, основанное на активизации аденилатциклазной системы и выработке циклических нуклеотидов.

Из-за актуальной дегидратации с интоксикацией нарушениям подвергается деятельность сердечно-сосудистой системы, проявляется это в снижении давления и проявлении тахикардии. Также клиническое состояние сопровождается острой формой набухания мозга и его отеком. Из-за нарушений, связанных с микроциркуляцией, а также с обезвоживанием, развиваются дистрофические процессы уже со стороны канальцев почек. Это, в свою очередь, приводит к развитию острой почечной недостаточности, в качестве первого клинического проявления которой отмечается олигурия – состояние, при котором уменьшается суточный объем выделения мочи с 1500 мл до 500, что происходит либо в результате пониженной фильтрации, либо в результате повышения всасывания, происходящего в почках. Впоследствии, помимо олигурии, происходит накопление в крови азотистых шлаков.

Как правило, примерно в 95-99% общего числа случаев распространения сальмонелл далее подслизистого слоя в кишечнике не происходит, что, однако, обуславливает развитие заболевания в гастроинтестинальной форме. В кровь возбудители попадают только в некоторых случаях, что, в свою очередь, определяет генерализованную форму заболевания, характеризуемую септическим либо тифоподобным течением. Недостаточность, актуальная для гуморальных и клеточных иммунных реакций, определяет переход к такой, генерализованной форме.

Проведение микроскопического исследования области стенки кишки определяет изменения, происходящие в сосудах в форме кровоизлияний, происходящих в подслизистый и слизистый слои кишечной стенки. Подслизистый слой, кроме нарушений микроциркуляции, характеризуется также развитием лейкоцитарной реакции и последующего отека.