Микотоксины являются природными загрязнителями зерна злаковых, бобовых, семян подсолнечника, а также овощей и фруктов. Они могут образовываться при хранении.
Микотоксины оказывают огромное влияние на здоровье населения и качество сельскохозяйственной продукции. Микотоксины вызывают иммунодепрессии животных, если присутствуют в корме. Иммунитет животных садится и это приводит к различным инфекционным заболеваниям. Происходит отказ от корма, снижение продуктивности, повреждение внутренних органов, язвенный стоматит, гипермальные некрозы.
Микотоксины не горчат, не пахнут и без специальных методик определить их наличие невозможно. Наиболее опасные и широко распространенные токсигенные виды грибов относятся к родам Aspergillus, Penicillium, Fusarium.
Необходимо постоянно предотвращать и контролировать зараженность зерна токсинопродуцирующими грибами!
Основные патогены зерна — продуценты микотоксинов
Род грибов | Продуцируемые микотоксины | Механизм действия |
Aspergillus | Афлатоксины Охратоксин А Стеригматоцистин Циклопиазоновая кислота | Гепатоканцерогенное (повреждение печени), нефротоксичное (повреждение почек), тератогенное (уродство плода) и мутагенное действие |
Penicillium | Охратоксин Ацитринин Патулин | |
Fusarium | Трихотецены группы А: Т-2 и НТ-2 токсины, диацетоксисцирпенол Трихотецены группы В: ниваленол, дезоксиниваленол, зеараленон, фумонизины (В1, В2, В3, В4), монилиформин | Иммуносупрессивное, нефротоксичное и канцерогенное действие |
Нормирование микотоксинов в кормах и пищевой продукции
Афлатоксины
- Афлатоксин В1 (<0,01÷0,5 мг/кг; в зерне и зерновых продуктах 0,005 мг/кг) зерно пшеницы, ячменя, овса, кукурузы, соя-бобы, комбикорма полнорационные для свиней, сельскохозяйственной птицы, комбикорма-концентраты для свиней, крупного рогатого скота, овец, пушных зверей, кроликов, нутрий, соевые шрот и жмых, арахисовый и хлопчатниковый шроты
- Афлатоксин М1 (ПДК 0,0005 мг/кг) в молоке и молочных продуктах В кормах, предназначенных для сельскохозяйственных животных, афлатоксины также обнаруживаются достаточно часто и в значительных количествах. Во многих странах с этим связано и обнаружение афлатоксинов в продуктах животного происхождения. Например, в молоке и тканях сельскохозяйственных животных, получавших корма, загрязненные микотоксинами, обнаружен афлатоксин М. Причем афлатоксин М, обнаружен как в цельном, так и в сухом молоке, и даже в молочных продуктах, подвергшихся технологической обработке (пастеризация, стерилизация, приготовление творога, йогурта, сыров и т. п.).
Одним из важных доказательств реальной опасности афлатоксинов для здоровья человека явилось установление корреляции между частотой и уровнем загрязнения пищевых продуктов афлатоксинами и частотой первичного рака печени среди населения.
Охратоксин А (<0,01÷0,5 мг/кг)
- зерно ячменя, комбикорма полнорационные для свиней, сельскохозяйственной птицы, комбикорма-концентраты для крупного рогатого скота
Продуцентами охратоксинов являются микроскопические грибы рода Aspergillus и Penicillium. Основными продуцентами являются A. ochraceus и P. Viridicatum.
Стеригматоцистин (0,025÷0,03 мг/кг)
- комбикорма полнорационные для свиней, солодовые ростки, свекловичный жом, фруктовый жом
Охратоксины
Охратоксины вырабатываются некоторыми видами грибов Aspergillus
и
Penicillium
. Основными продуцентами являются
A.ochraceus
и
P.viridicatum
. Эти грибы встречаются повсеместно.
Aspergillus
вырабатывает охратоксины при повышенной температуре и влажности, а
Penicillium
уже при 5ºС. Охратоксины – соединения высокой токсичности, с ярко выраженным тератогенным эффектом.
Охратоксины А,В, и С представляют собой группу близких по структуре соединений, являющихся изокумаринами, связанными с L
-фенилаланином пептидной связью. В зависимости от природы радикалов образуются охратоксины различных типов (табл. 2.3.).
Охратоксин А – бесцветное кристаллическое вещество, слабо растворимое в воде, умеренно растворимое в полярных органических растворителях (метанол, хлороформ), а также в водном растворе карбоната натрия. В химически чистом виде он нестабилен и очень чувствителен к воздействию света и воздуха, однако в растворе этанола может сохраняться без изменений в течение длительного времени. В УФ свете обладает зеленой флуоресценцией.
Охратоксин В – кристаллическое вещество, аналог охратоксина А, не содержащий атом хлора. Он примерно в 50 раз менее токсичен, чем охратоксин А. В УФ-свете обладает голубой флуоресценцией.
Охратоксин С – аморфное вещество, этиловый эфир охратоксина А, близок к нему по токсичности, но в качестве природного загрязнителя пищевых продуктов и кормов не обнаружен. В У-свете обладает бледно-зеленой флуоресценцией.
Охратоксины принадлежат к токсичным микотоксинам, обладают высокой токсичностью для печени, почек, тератогенными и иммунодепрессивными свойствами, выраженным гемолитическим эффектом. Из охратоксинов наиболее токсичен охратоксин А (ЛД50 = 3,4 мг/кг, (однодневные цыплята, перорально)). Он более токсичен, чем афлатоксины. Другие микотоксины этой группы на порядок менее токсичны.
Биохимические, молекулярные, клеточные механизмы действия охратоксинов изучены недостаточно. Известно, что охратоксин А подавляет синтез протеина и метаболизм углеводов, в частности гликоногеноз, путем ингибирования активности фенилаланин – т-РНК – специфического фермента, играющего ключевую роль в начальной стадии синтеза протеина.
Охратоксин А обнаружен в кукурузе, ячмене, пшенице, овсе, ячмене. Важен и опасен тот факт, что при высоком загрязнении кормового зерна и комбикормов охратоксин А обнаруживается в животноводческой продукции (ветчина, бекон, колбасы). Охратоксин В встречается редко. Охратоксины также поражают все плоды садово-огородных культур. Особенно сильно поражаются яблоки: до 50% урожая может загрязняться микотоксинами.
Следует отметить, что охратоксины являются стабильными соединениями. Так, например, при длительном прогревании пшеницы, загрязненной охратоксином А, его содержание снижалось лишь на 32% (при температуре 250–300ºС). Таким образом, распространненость в продуктах питания, токсичность и устойчивость охратоксинов создают реальную опасность для здоровья человека.
Методы анализа
Охратоксин А содержится в окисленных продуктах. Он легко растворяется во многих органических растворителях, что используется для экстракции. Наиболее часто используется экстракция хлороформом и водным раствором фосфорной кислоты с последующей очисткой на колонке и количественное определение с использованием метода ТСХ.
Разработан также метод ВЭЖХ. Перед ВЭЖХ анализом образец готовят следующим образом. Измельченный образец обрабатывают смесью 2 М соляной кислоты и 0,4 М раствора хлорида магния. После гомогенизации экстрагируют толуолом в течение 60 мин. Смесь центрифугируют. Центрифугат пропускают через колонку с силикагелем и промывают смесью толуола с ацетоном (подвижная фаза). Охратоксин А элюируется смесью толуола с уксусной кислотой (9:1) и высушивается при 40°С. Остаток растворяют и фильтруют. Анализ проводят с использованием ВЭЖХ.
Кроме того, разработан ряд биопроб на креветках, бактериях, но полученные результаты не позволили использовать эти методы для определения охратоксинов.
Нормирование в кормах
Патулин (<0,025÷0,5 мг/кг; в яблочных продуктах не более 0,05 мг/кг)
- комбикорма полнорационные для свиней, сельскохозяйственной птицы, комбикорма-концентраты для свиней, крупного рогатого скота, овец, пушных зверей, кроликов, нутрий, лошадей, солодовые ростки, свекловичный жом, фруктовый жом
Охратоксин А(<0,01÷0,5 мг/кг)
- зерно ячменя, комбикорма полнорационные для свиней, сельскохозяйственной птицы, комбикорма-концентраты для крупного рогатого скота
Если токсикологический анализ не выявил микотоксины в образце зерна, нельзя быть уверенным в его «чистоте», в том случае, когда микологический анализ показал присутствие фузароза.
Взаимодействие микотоксинов может быть дополняющим, синергетическим и антагонистичным. Чаще зерно загрязнено различными метаболитами и их комбинация может приводить к усилению суммарного токсического действия.
Во время хранения на зерне, пораженном грибами рора Fusarium, начинают развиваться плесени хранения — Penicillum и Aspergillum. В природе они неконкурентоспособны, но становятся таковыми в условиях повышенной влажности при хранении. Аспергиллы и пенициллы продуцируют афлатоксины и охротоксины, которые тоже чрезвычайно опасны.
Тем не менее кореляция между процентом пораженных зерен и количеством микотоксинов отсутствует. Так в зерне с заражением 15% микотоксины могут отсутствовать полностью, а в зерне с зараженностью 2% наоборот — концентрация микотоксинов может превысить допустимую. Это объясняется тем, что концентрация микотоксинов зависит от поражения зерновки — при разной степени поражения вклад биомассы в количество продуцируемых микотоксинов разный.
В последние годы для определения содержания микотоксинов активно применяются молекулярно-генетические методы. Из образца зерна делается мука и из нее выделяется ДНК. В этом образце общей ДНК есть ДНК и растения, и вирусов, и бактерий, и грибов, которые там присутствует. Современные методы позволяют определить, какое количество ДНК целевого объекта присутствует в этом образце общей ДНК. Таким образом, можно определить и эффективность фунгицидов.
Основной путь решения проблемы качества зерновой продукции — это уменьшение исходной зараженности сырья. Для этого необходимо комбинировать устойчивые сорта с качественной обработкой колоса эффективными фунгицидами при разумной агротехнике. Следует соблюдать условия хранения продукции на всем протяжении от поля до использования и тщательный контроль качества.
Рекомендации по контролю микотоксинов от посева до уборки и хранения
До посева
- Правильно подберите фунгицид для обработки семян: Многочисленные исследования подтверждают возможность эндогенного переноса инфекции Fusarium graminearum от зараженных семян к колосу, что приводит к проявлению фузариоза колоса и накоплению микотоксинов в зерне нового урожая. Обработка семян фунгицидами, содержащими флудиоксонил (СЕЛЕСТ ТОП, СЕЛЕСТ МАКС, МАКСИМ ПЛЮС, МАКСИМ ФОРТЕ), блокирует рост инфекции на ранней стадии и предотвращает дальнейшее развитие патогена и его передвижение по растению от семян к колосьям. Также фунгицидный компонент влияет на процент содержания в урожае дезоксиниваленола (ДОН) — микотоксина, вырабатываемого возбудителем фузариоза в пшенице. Исследования показывают, что уровень содержания микотоксинов (в частности ДОН) в зерне с участков, засеянных обработанными флудиоксонилом семенами, значительно ниже (до 20%), чем в других, где посевной материал не подвергали обработке. В условиях изолированной среды в урожае, полученном с защищенного участка, ДОН отсутствует полностью.
В период вегетации
- Используйте фунгициды в период вегетации: Наибольший эффект защиты от фузариоза колоса для зерновых достигается при обработках, когда 30–50% посева находится в фазе начала выхода колоса. Используйте рекомендованные дозировки фунгицидов АЛЬТО ТУРБО, АЛЬТО СУПЕР и АМИСТАР ТРИО.
Во время уборки
- Проводите уборку при низкой влажности и полной зрелости зерна. Предварительно оцените содержание микотоксинов в урожае. Отсрочка сбора урожая зараженных культур, повышенная влажность в момент уборки могут увеличить содержание микотоксинов!
При хранении
- Разделяйте зерно на пищевое/кормовое.
- Проводите закладку различных категорий зерна в раздельные бурты, раздельно проводите очистку и сушку. При повышенной влажности уборку необходимо проводить прямым комбайнированием. Закладка на хранение зерна с высоким содержанием влаги приводит к развитию грибной инфекции (Fusarium + Aspergillus + Penicillium) и накоплению микотоксинов!
- Осуществляйте контроль качества зерна при приеме в хранилище.
- Предотвращайте загрязнение хранящегося зерна извне и перекрестное загрязнение между отдельно хранящимися партиями.
- Поддерживайте оптимальные параметры хранения! Наиболее важный показатель — влажность зерна.
- Осуществляйте борьбу с вредителями запасов.
Микотоксины
Микотоксины – это общий термин для метаболитов, продуцируемых плесенью на пищевых продуктах и представляющих угрозу для здоровья человека и животных. Афлатоксины – наиболее опасная группа, которая по классификации ВОЗ относится к канцерогенам и подлежит строгому регулированию во многих странах мира. Экспресс-контроль содержания микотоксинов в пищевых продуктах – важнейшая задача для обеспечения пищевой безопасности.
В России и странах Таможенного союза максимально допустимые уровни микотоксинов в зерне и пищевых продуктах определены в Технических регламентах Таможенного cоюза ТРТС 015-2011, ТРТС 021-2011и СанПиН 2.3.2.1078-01. Согласно СанПиН, в сельскохозяйственной продукции контролируется содержание афлатоксина B1, дезоксиниваленола (вомитоксин), охратоксина А, зеараленона, Т-2 токсина, в плодоовощной – патулина, в молочной – афлатоксина М1. Дополнительно при контроле зерна и зернопродуктов, по ТРТС 015-2011 регламентируется содержание фумонизина и сумма афлатоксинов B1, B2, G1, G2. Приоритетными загрязнителями являются: для зерновых продуктов — дезоксиниваленол; для орехов и семян масличных — афлатоксин В1; для продуктов переработки фруктов и овощей — патулин. Содержание охратоксина А контролируется в продовольственном зерне и мукомольно-крупяных изделиях. Не допускается присутствие микотоксинов в продуктах детского и диетического питания.
Европейское законодательство по микотоксинам в пищевых продуктах и кормах состоит из двух основных положений: Регламент Комиссии (EC) № 1881/2006, устанавливающее максимальные уровни для некоторых загрязняющих веществ в пищевых продуктах, а также последнее обновление — Регламент Комиссии (EU) № 1058/2012 от 12 ноября 2012 г., вносящий изменения в № 1881/2006 и устанавливающий максимальные пределы остатков для афлатоксинов, офратоксина A, патулина, деоксиниваленола, зеареленона, фумонизина, токсинов T2 и HT2 в различных продуктах. Микотоксины не разрушаются при термообработке, и на них почти не влияют готовка, замораживание или пищеварение. Эти свойства делают исследование и количественное определение микотоксинов в пище очень важным. Компания Shimadzu представляет новую хроматографическую систему для скрининга микотоксинов.
Современные способы обнаружения и определения содержания микотоксинов в пищевых продуктах и кормах многочисленны и разнообразны, начиная от простых и экспрессных скрининговых и заканчивая дорогостоящими высокочувствительными хроматомасс-спектрометрическими методами анализа. Часто используются методики определения отдельных видов с помощью жидкостной хроматографии, однако пока нет способа регистрации всех нормируемых микотоксинов из одной навески.
Стандартизованными инструментальными методами определения микотоксинов являются жидкостная хроматография и жидкостная хроматомасс-спектрометрия. Основные ГОСТы по анализу микотоксинов:
ЖХ-МС:
микотоксины:
- ГОСТ 34140-2017 «Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием»
- ГОСТ 32835-2014 «Продукция соковая. Определение микотоксинов методом тандемной высокоэффективной жидкостной хроматомасс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС)»
Жидкостные хроматомасс-спектрометры